漆膜耐霉菌性测定法
Test method for determining the resistance of paints film to mold
1 范围
本标准规定了漆膜耐霉菌性试验所涉及的试验原理、仪器设备和材料、培养基和试剂、试验程序以及试验报告。
本标准适用于建筑涂料漆膜耐霉菌性的测定,其他类型漆膜耐霉菌性的测定可参考本标准。
2 规范性引用文件
下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件,仅注日期的版本适用于本文
件。凡是不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。
GB/T 3186 色漆、清漆和色漆与清漆用原材料 取样
GB/T 6682-2008 分析实验室用水规格和试验方法
GB/T 9271-2008 色漆和清漆 标准试板
GB/T 9278 涂料试样状态调节和试验的温湿度
GB/T 23987-2009 色漆和清漆 涂层的人工气候老化曝露 曝露于荧光紫外线和水
YY0569-2011 Ⅱ级生物安全柜
3 术语和定义
下列术语和定义适用于本文件。
3.1
耐霉菌性
防霉菌性
抗霉菌性
耐受或阻止、抑制霉菌孢子及菌丝体的生长与繁殖的能力。
4 试验原理
模拟自然界霉菌生长的环境条件,按霉菌生长的生理特点设计加速试验。在试样表面接种霉菌孢
子,然后将试样放置在适合霉菌生长的环境条件下培养,观察霉菌在试样表面的生长情况。根据试样表面长霉程度对漆膜的耐霉菌性进行评定分级。
5 仪器设备和材料
5.1 恒温恒湿培养箱:控温范围10℃~50℃,温度均匀性不超过±2℃,温度波动度不超过±1℃,相
对湿度范围50%~95%,精度5%。
5.2 生化培养箱:控温范围5℃~50℃,温度均匀性不超过±2℃,温度波动度不超过±1℃。
5.3 高压蒸汽灭菌锅:控温范围101℃~137℃,温度均匀性不超过±2℃,温度波动度不超过±2℃。
5.4 干热灭菌箱:控温范围50℃~200℃,温度均匀性不超过±2℃,温度波动度不超过±2℃。
5.5 天平:实际分度值d=10mg、d=1mg、d=0.1mg。
5.6 pH计:分度值0.01。
5.7 离心机:转速500r/min~5000r/min。
5.8 生物安全柜:符合YY0569-2011规定的Ⅱ级生物安全柜要求。
5.9 显微镜:普通光学显微镜。
5.10 冰箱:控温范围4℃~10℃,温度均匀性不超过±2℃,温度波动度不超过±2℃。
5.11 喷雾器:容量为30mL。
5.12 量筒:容量为10mL、50mL、100mL、500mL和1000mL。
5.13 培养皿:直径ϕ90mm。
5.14 血球计数板。
5.15 三角瓶:容量为125mL、500mL。
5.16 接种环。
5.17 玻璃珠:粒径3mm~7mm。
5.18 玻璃漏斗。
5.19 纤维滤纸:定性纤维滤纸。
5.20 烧杯:容量为500mL和1000mL。
5.21 无色玻璃试管:规格10mm×180mm。
6 培养基和试剂
6.1 一般要求
除另有规定外,所有试验均使用化学纯或化学纯以上的试剂和符合GB/T 6682-2008中三级水要
求的蒸馏水或去离子水。
6.2 无菌水
准确称取0.005g分散剂(如吐温80)加入到100mL水中搅拌均匀,按10mL/支分装到无色玻璃
试管(5.21)中,放入高压蒸汽灭菌锅(5.3)中在(121±2)℃条件下灭菌20min后备用。
6.3 营养盐溶液
6.3.1 营养盐溶液组分
营养盐溶液的组分见表1。
6.3.2 制备方法
按表1在烧杯(5.20)中准确称取营养盐溶液组分,用水加热溶解后,加水至1000mL,用0.1mol/L氢
氧化钠溶液调节pH值为6.0~6.5,用三角瓶(5.15)分装后置于高压蒸汽灭菌锅(5.3)中在121±2)℃条件下灭菌20min后备用。
6.4 营养盐琼脂培养基
准确称取20.0g琼脂到1000mL未灭菌的营养盐溶液(6.3.2)中,加热搅拌熔化,用0.1mol/L氢
氧化钠溶液调节pH值为6.0~6.5,用三角瓶(5.15)分装后置于高压蒸汽灭菌锅(5.3)中在(121±2)℃条件下灭菌20min后备用。
6.5 马铃薯-葡萄糖培养基(PDA)
6.5.1 马铃薯-葡萄糖培养基(PDA)组分
马铃薯-葡萄糖培养基(PDA)组分见表2。
6.5.2 制备方法
取新鲜无霉烂的马铃薯,去皮切片,准确称取300.0g,加入600mL水煮沸20min后过滤,取汁液。
按表2称取准确其余组分,加入到汁液中煮沸溶解,加水至1000mL,用无色玻璃试管(5.21)分装,置于高压蒸汽灭菌锅(5.3)中,在(121±2)℃条件下灭菌20min,趁热取出试管并倾斜摆放,自然凝固成斜面后备用。也可用马铃薯-葡萄糖培养基(PDA)商品培养基,按照产品标签要求制备。
7 试验程序
7.1 混合孢子液的制备
7.1.1 试验菌种
耐霉菌性试验所用菌种见表3。经有关方商定后,可增加其他试验菌种。
7.1.2 菌种培养及保藏
在生物安全柜(5.8)内用无菌接种环(5.16)分别接种各种菌种(表3)于马铃薯-葡萄糖培养基
(PDA)(6.5)上,在生化培养箱(5.2)中,于28℃~30℃条件下培养至斜面长满霉菌孢子,培养后置于
3℃~10℃ 条件下保藏,时间不超过3个月。
7.1.3 混合霉菌孢子液的制备
在生物安全柜(5.8)内用无菌接种环(5.16)挑取霉菌孢子(7.1.2),接种于马铃薯-葡萄糖培养基
(PDA)(6.5)上,在28℃~30℃条件下培养7d~14d,当培养基表面长满霉菌孢子时,加入10mL无
菌水(6.2),在生物安全柜(5.8)内用无菌接种环(5.16)在无菌操作条件下轻轻地刮取霉菌培养物表面的霉菌孢子,制成霉菌孢子悬浮液。
将霉菌孢子悬浮液倒入125mL带有塞子并预先装有45mL无菌水(6.2)和10个~15个无菌玻璃
珠(5.17)的无菌三角瓶(5.15)中,用力振荡无菌三角瓶(5.15)以打散孢子团并使霉菌孢子从子实体中释放出来。将带有无菌纤维滤纸(5.19)的无菌玻璃漏斗(5.18)置于无菌三角瓶(5.15)上,把振荡后的霉菌孢子悬浮液倒入无菌玻璃漏斗(5.18)内过滤,除去菌丝和培养基碎片。
无菌条件下以4000r/min的速度离心已过滤的霉菌孢子悬浮液,去掉上清液,加入10mL~
50mL无菌水(6.2)于孢子沉淀物中,充分混匀,然后离心得到霉菌孢子沉淀物,重新加入无菌水混匀,
再次离心得到霉菌孢子沉淀物。
将霉菌孢子沉淀物用营养盐溶液(6.3)稀释,用血球计数板(5.14)或其他方法测定霉菌孢子浓度,
并稀释使悬浮液中霉菌孢子浓度为0.8×106 个/毫升~1.2×106 个/毫升。
制备好的每种霉菌孢子悬浮液可在4℃~10℃冰箱(5.10)中保存不超过4d,试验前将制备的每
种霉菌孢子悬浮液等体积混合,获得混合霉菌孢子液。
7.2 样品
产品按GB/T 3186规定取样,取样量根据检验需要确定。
7.3 试样的准备
7.3.1 试验样品
除另有规定外,采用铝板、玻璃板等不易生锈和吸潮的底材,尺寸为50mm×50mm,厚度至少为
1mm。
除另有规定外,按GB/T 9271-2008的规定处理每一块试板,铝板等金属底材可用合适的砂纸打
磨。然后按产品的规定施涂及养护3块试板作为试验样品。室外用产品试验样品的漆膜在耐霉菌性试验前按GB/T 23987-2009中8.2.1的规定进行老化试验,辐照度为0.83W·m-2·nm-1,试验时间为100h。除另有商定外,试验前试验样品应在GB/T 9278规定的条件下至少调节4h。
7.3.2 对照样品
3张尺寸为(50×50)mm的无菌纤维滤纸(5.19)。
7.4 接种培养
7.4.1 培养皿法
向无菌培养皿(5.13)中倒入约20mL营养盐琼脂培养基(6.4),当培养基凝固后,在无菌条件下,将
3个试验样品和3个对照样品分别放置在装有培养基的培养皿表面中央。
用无菌喷雾器(5.11)向每个试验样品和对照样品表面和培养基表面均匀喷洒0.4mL~0.6mL混
合霉菌孢子液(7.1.3),使整个试验样品和对照样品表面和培养基表面湿润。
将已接种的试验样品和对照样品置于恒温恒湿培养箱(5.1)中,在温度25℃~30℃、相对湿度不
低于85%的条件下培养7d后目视检查对照样品上霉菌生长情况,3个对照样品均应有霉菌生长,否则试验无效,应重新进行试验。若每个对照样品上均可见霉菌生长,则继续培养试验样品和对照样品至28d后按7.5进行结果评定。经有关方商定,可以延长培养时间至56d。
7.4.2 悬挂法
本方法适用于大件试验样品、不规则试验样品和无法用培养皿法测试的试验样品。
把准备好的混合霉菌孢子液(7.1.3),分别接种于3个试验样品和3个对照样品的表面。
将已接种的试验样品和对照样品在室温下晾干10min~30min,悬挂在带有紧密盖子、能放置试
验样品的玻璃或塑料容器内。容器的大小与形状应使得在它内部空间的底部具有足够敞露的水表面积,保证放置的样品有足够的空间,不相互接触干扰,并保持容器内相对湿度大于85%。悬挂好的样品应确保不被水触及或溅到。
把悬挂已接种试验样品和对照样品的容器放在恒温恒湿培养箱(5.1)中,在温度25℃~30℃,相
对湿度不低于85%的条件下培养7d后目视检查对照样品上霉菌生长情况,3个对照样品均应有霉菌生长,否则试验无效,应重新进行试验。若每个对照样品上均可见霉菌生长,则继续培养试验样品和对照样品至28d后按7.5进行结果评定。经有关方商定,可以延长培养时间至56d。
7.5 结果评定
培养结束后,将试验样品从恒温恒湿培养箱(5.1)取出,应先目视检查,长霉面积占比小于10%时用
显微镜(5.9)放大50倍观察,按表4评定耐霉菌性等级。结果以至少两块样板的级别一致为准,若任意两个平行试样的耐霉菌性等级相差两个及以上等级时应重新进行试验。
8 试验报告
试验报告应包括以下内容:
a) 本标准编号;
b) 菌种名称、菌株号;
c) 试验样品培养温度、相对湿度和时间;
d) 试验样品长霉面积和耐霉菌性等级(如用显微镜进行检查,应注明显微镜的放大倍数);
e) 试验日期;
f) 试验样品的尺寸;
g) 测试前后试验样品照片;
h) 与规定的试验方法的任何不同之处。
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